轉(zhuǎn)基因構(gòu)建Cry1Ac基因-NOS終止子染料法qPCR試劑盒操作方法：

1 確定PCR反應(yīng)液或其他酶促反應(yīng)液的體積。將PCR反應(yīng)液或其他酶促反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的1.5 ml離心管中，向其中加入等體積溶液BD。混合均勻。

2 將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中，靜置2min。

3  12,000 rpm離心1min，棄濾液。

注：此時(shí)DNA片段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

若溶液體積大于純化柱容積（800 μl），可分兩次離心。

4 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

注：溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋，即含80%乙醇。

此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質(zhì)，以獲得高質(zhì)量DNA片段。

5 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

6  12,000 rpm 離心 3min，以徹底去除純化柱中的液體。

注：此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免殘留乙醇影響后續(xù)酶促反應(yīng)。同時(shí)也利于DNA片段的充分溶解。

7 將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處，懸空滴加30-100 μl溶液Eluent（60℃預(yù)熱），靜置2min。12,000 rpm 離心1min，管底即為目的DNA片段。貯存于-20℃。

注：溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替，但其pH需為8.0-8.5，加入體積視DNA目的片段、用戶對目的片段濃度要求而定。

產(chǎn)品僅用于科研對溶液Eluent 60℃預(yù)熱，會提高提取DNA目的片段的產(chǎn)量。