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VERO細(xì)胞衍生株細(xì)胞培養(yǎng)步驟

發(fā)表時(shí)間:2022-12-07
VERO細(xì)胞衍生株細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

重樓皂苷I Chonglou saponin I 50773-41-6
重樓皂苷II Polyphyllin II 76296-72-5
竹葉香附素A Raddeanin(Anemodeanin) A 89412-79-3
梓醇 Catalpol 2415-24-9
紫草素 Shikonin 517-89-5,54952-43-1
紫草酸 lithospermic acid 28831-65-4
紫丁香苷 Syringin 118-34-3
紫花前胡素 Decursin 5928-25-6
紫堇靈 Corynoline 18797-79-0
紫杉醇 Paclitaxel 33069-62-4
紫杉葉素 Taxifolin 480-18-2
紫菀酮 Shionone 10376-48-4
紫蕓英苷 Astragalin 480-10-4
醉魚草皂苷Ⅳb Clinopodiside A 142809-89-0
正丁基苯酞 3-n-Butylphthalide 6066-49-5
棕櫚酸 palmitic acid 1957/10/3
知母皂苷E Anemarsaponin E 136565-73-6
紫檀芪 Pterostilbene 537-42-8
異歐前胡素 Isoimperatorin 482-45-1
異嗪皮啶 Isofraxidin 486-21-5
異鼠李素 Isorhamnetin 480-19-3


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