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細胞凋亡是細胞的基本特征之一
發表時間:2023-08-18
Annexin V是一種檢測細胞凋亡的試劑,在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側,細胞發生凋亡早期,膜磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。Annexin V作為一種磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,它通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V是檢測細胞早期凋亡的靈敏指標。
用標記了FITC的AnnexinⅤ作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生,正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的。Propidium iodide(PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現紅色。將AnnexinⅤ與PI匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區分開來。
細胞凋亡是細胞的基本特征之一,它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定等方面起著十分重要的作用。在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS高親和力特異性結合。
折疊注意事項
1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
2.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
3.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質,在操作時請注意避光。
4.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響,如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發生凋亡時PS翻轉的比例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間等,把這些影響因素進行優化對實驗成功與否至關重要。