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客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

磺胺二甲氧嘧啶單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

磺胺三甲氧芐胺嘧啶單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

磺胺喹噁啉單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

磺胺對(duì)甲氧嘧啶單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

鏈霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

四環(huán)素單克隆抗體 小鼠單抗 0.05

金霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

土霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

強(qiáng)力霉單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

新霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

卡那霉素單克隆抗體 小鼠單抗 1

大觀霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

林可霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.2

泰樂菌素單克隆抗體 小鼠單抗 1

紅霉素檢測(cè)試劑盒 小鼠單抗 0.1

慶大霉素單克隆抗體 小鼠單抗 0.1

頭包類藥物單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

頭包啦啶單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

頭包噻呋單克隆抗體 小鼠單抗 0.5

武氏盾螨探針法熒光定量PCR試劑盒 Acarapis woodi

萊氏無(wú)膽甾原體探針法熒光定量PCR試劑盒 Acholeplasma laidlawii 

無(wú)色桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Achromobacter spp.

鮑氏不動(dòng)桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Acinetobacter baumannii

魯氏不動(dòng)桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Acinetobacter lwoffi

不動(dòng)桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Acinetobacter spp.

枝頂孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒 Acremonium strictum

伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinobacillus actinomycetemcomitans

豬胸膜放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinobacillus pleuropneumoniae

馬杜拉放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomadura madurae

白樂杰馬杜拉放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomadura pelletieri

牛型放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces bovis

歐洲放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces europaeus

戈氏放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces gerencseriae

衣氏放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces israelii

內(nèi)氏放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces naeslundii

化膿放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces pyogenes

放線菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Actinomyces spp.

腺伴隨病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Adeno-associated Virus(AAV)

腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)

腺病毒B型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)

鮑樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書腺病毒C型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)

腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)

腺病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)

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