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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

松杉靈芝IAPP (Islet Amyloid Polypeptide) ELISA Kit拉丁屬名: Ganoderma tsugae Murrill

枯草芽孢桿菌ANGPTL3 (Angiopoietin Like Protein 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

相思根瘤菌FETUA (Fetuin A) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

類芽孢桿菌屬SDC1 (Syndecan 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Paenibacillus  sp.

枯草芽孢桿菌IGFBP5 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5) ELISA Kit  拉丁屬名: Bacillus subtilis

高地芽胞桿菌 ApoA2 (Apolipoprotein A2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus altitudinis

耐冷冷桿菌ApoC3 (Apolipoprotein C3) ELISA Kit拉丁屬名: Cryobacterium  psychrotolerans

鏈霉菌CYP2E1 (Cytochrome P450, family 2, subfamily E, polypeptide 1) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces abyssalis

黃皮疣柄牛肝菌MOG (Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

籬邊粘褶菌AZGP1 (Zinc-alpha-2-glycoprotein) ELISA Kit拉丁屬名: Gloeophyllum sepiarium

綠色木霉=木素木霉LRP-1 (Low-Density Lipoprotein-Receptor-Related Protein) ELISA Kit用途: 產(chǎn)纖維素酶

暗孢節(jié)菱孢菌MUC1 (Mucin 1) ELISA Kit用途: 植物病原物，為該病防治提供依據(jù)

韓國梅奇酵母CAT (Catalase) ELISA kit拉丁屬名: Metschnikowia koreensis

金龜子綠僵菌Klotho ELISA Kit拉丁屬名: Metarhizium anisopliae

短芽胞桿菌Nrf2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2) ELISA Kit用途: 可以在含5000mg/l的綠嘧磺隆無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長
敗血金黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 ADCY2  腺苷酸環(huán)化酶2抗體SDS溶液(20%,pH7.2)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ADCY3  腺苷酸環(huán)化酶3抗體4,9-二甲氧基鐵屎米酮4,9-Dimethoxycanthin-6-one化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

ADCY4  腺苷酸環(huán)化酶4抗體3-O-(2'E,4'E-癸二烯酰基)-20-O-乙酰巨大戟二萜醇3-O-(2'E ,4'E-decadienoyl)-20-O-acetylingenol化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

ADCY5  腺苷酸環(huán)化酶5抗體硬脂酸甲酯Methyl stearate中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C19H38O2 分 子 量: 298.50

ADCY6  腺苷酸環(huán)化酶6抗體蔗糖溶液(1mol/L)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ADCY7  腺苷酸環(huán)化酶7抗體珠子草次素(+/-)-nirtetralin化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C24H30O7 分 子 量: 430.491

ADCY8  腺苷酸環(huán)化酶8抗體塞來西布Celecoxib化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C17H14F3N3O2S 分 子 量: 381.37