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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

伴放線菌團聚桿菌NNE (Non-Neuronal Enolase) ELISA Kit拉丁屬名: Aggregatibacter  actinomycetemcomitans

枯草芽孢桿菌COMP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

膠孢BAK1 (Bcl2 Antagonist/Killer 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

堿湖迪茨氏菌PGF (Placental Growth Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Dietzia natronolimnaea

雜色曲霉SEPP1 (Selenoprotein P) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

異配囊接霉FLOT2 (Flotillin 2) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor heterogamus var. longisuspensoris

枯草芽孢桿菌MAN1A1 (Mannosidase Alpha Class 1A Member 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

栗酒裂殖酵母ATA (Angiotensinase A) ELISA Kit拉丁屬名: Schizosaccharomyces pombe

細極鏈格孢CYFRA21-1 (Cytokeratin Fragment Antigen 21-1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

柑橘青霉菌GCP-2 (Granulocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

光帽鱗傘PDGF (Platelet-Derived Growth Factor) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

肉桂球形孢囊菌BANP (BTG3 Associated Nuclear Protein) ELISA Kit  拉丁屬名: Sphaerisporangium cinnabarinum

短小芽孢桿菌SRF/IF (Skin Reactive Factor/Inflammatory Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  pumilus

大腸桿菌LOX-1 (Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1) ELISA Kit用途: 科學研究,功能檢測

巨獸芽孢桿菌CT-1 (Cardiotrophin 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus megaterium
產腸毒素性大腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒規格BNIP2  Bcl2相互作用蛋白2抗體五味子酯乙Schizantherin B中藥標準品  分 子 式: C28H34O9 分 子 量: 514.56416

CLDND1  膜蛋白CLDND1抗體3,27-二羥基-20(29)-流明-28-酸甲酯3,27-Dihydroxy-20(29)-lupen-28-oic acid methyl ester對照藥材 分 子 式: C31H50O4 分 子 量: 486.7263

SCN11A/NAV1.9  鈉通道蛋白11α抗體甘露三糖D-Glucose, O-a-D-galactopyranosyl-(1®6)-O-a-D-galactopyranosyl-(1®6)-化學標準品 分 子 式: C18H32O16 分 子 量:

SCN10A/NAV1.8  鈉通道蛋白10α抗體蒿本內酯Ligustilide中藥標準品  分 子 式: C12H14O2 分 子 量: 190.24

ICAM5/Telencephalin  細胞間粘附分子5抗體NTE緩沖液(10×,pH7.4)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SCN1B  鈉離子通道β1抗體變性鮭魚精DNA(10mg/ml)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SCN8A/Nav1.6  鈉通道蛋白8α抗體對羥基苯甲酸乙酯Ethyl 4-hydroxybenzoate中藥標準品  分 子 式: C9H10O3 分 子 量: 166.1739