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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

黑曲霉RUNX2 (Runt-Related Transcription Factor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus niger

香菇γGT1 (Gamma Glutamyltransferase 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

明尼蘇達(dá)被毛孢TGF-α (Transforming Growth Factor α) ELISA Kit拉丁屬名: Hirsula minnesotensis

武夷小單孢菌EM2 (Endomorphin 2) ELISA Kit用途: 代謝產(chǎn)物具有活性。

北京芽孢桿菌TL1A (Tumor Necrosis Factor Related Ligand 1A) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus beijingensis

米曲霉ETFβ (Electron Transfer Flavoprotein Beta Polypeptide) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus oryzae

類諾卡氏菌NUP37 (Nucleoporin 37kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Nocardioides sp.

毒蠅鵝膏菌β-CTx (Beta Crosslaps) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

泡囊短波單胞菌SEMA4C (Semaphorin 4C) ELISA Kit用途: 分類、研究，具有用作耐重金屬基因資源潛力。

大腸埃希氏菌AKAP1 (A Kinase Anchor Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia coli

PseudarthrobacterADCY4 (Adenylate Cyclase 4) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudarthrobacter siccitolerans

弗雷德里克斯堡假單胞菌CMLC-1 (Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  frederiksbergensis

大腸桿菌HB (Hemoglobin) ELISA Kit用途: 獲得來源于Thermus菌屬的耐高溫酶類用于科學(xué)研究及功能檢測

康氏木霉EGR1 (Early Growth Response Protein 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蒼白鹽八疊球菌APA (Anti-Phospholipid Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Halosarcina pallida
馬病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格MAGEB1  相關(guān)抗原B1抗體白鮮堿dictamnine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C12H9NO2 分 子 量: 199.2

MAGEB2  相關(guān)抗原B2抗體堿性品紅乙醇溶液(5%)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MAGEB3  相關(guān)抗原B3抗體濱蒿內(nèi)酯6,7-Dimethoxycoumarin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C11H10O4 分 子 量: 206.19

MAGEB4  相關(guān)抗原B4抗體牛血清白蛋白溶液(1% BSA)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MAGEB6  相關(guān)抗原B6抗體pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液(pH=1.68)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MAGEC1  相關(guān)抗原C1抗體水楊酸鈉Sodium salicylate化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C7H5NaO3 分 子 量: 160.1

MAGEE1/MAGEC2  相關(guān)抗原C2抗體哈巴苷[1S-(1α,4aα,5α,7α,7aα)]-1,4a,5,6,7,7a-hexahydro-4a,5,7-trihydroxy-7-methylcyclopenta[c]pyran-1-yl β-D-glucopyranoside中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C15H24O10 分 子 量: 364.34506