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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

黃赭色鏈霉菌Monkey αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸桿菌Monkey LH (Luteinizing Hormone) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

橢圓釀酒酵母Monkey PI (Proinsulin) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces cervisiae Hansen var. ellipsoideus (Hansen) Dekker

空泡鹽紅菌Monkey PAFAHIB3 (Platelet Activating Factor Acetylhydrolase Ib3) ELISA Kit 拉丁屬名: Halorubrum vacuolatum

黑曲霉Monkey NFKBIE (Nuclear Factor Of Kappa Light Polypeptide Gene Enhancer In B-cells Inhibitor Epsilon) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus niger

大腸埃希菌Monkey CSF2Rβ (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

側孢短芽胞桿菌Monkey GAP (GTPase Activating Protein) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淡紫擬青霉Monkey Bcl-3 (B-cell Leukemia/Lymphoma 3) ELISA Kit 用途: 用作生物防治研究

小平菇（秀珍菇）Monkey C1r (Complement Component 1R) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

根瘤菌Monkey AFP-L3 (Alpha-Fetoprotein Lens Culinaris Agglutinin 3) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

豌豆根瘤菌Monkey LTβR (Lymphotoxin Beta Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizobium leguminosarum

大腸桿菌Monkey STAT6 (Signal Transducer and Activator of Transcription 6) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

吸水鏈霉菌Monkey DPP10 (Dipeptidyl Peptidase X) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces hygroscopicus (Jensen) Waksman et Henrici

熱帶假絲酵母Monkey TEP1 (Telomerase Associated Protein 1) ELISA Kit用途: 水解液發酵用菌

頂孢頭孢霉Monkey AKAP1 (A Kinase Anchor Protein 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
幼禽螺桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書RINT1  胞膜間內質網調節蛋白1抗體三苯基氯化錫Chlorotriphenyltin化學標準品 分 子 式: C18H15ClSn 分 子 量: 385.46

RMND1  減數分裂同源蛋白1抗體TMB顯色液(組化或膜HRP)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SGTA  小谷氨酰胺三角四肽重復區蛋白α抗體車葉草苷Asperuloside中藥標準品  分 子 式: C18H22O11 分 子 量: 414.36068

SUGT1  SUGT1蛋白抗體蛻皮甾酮-20,22-單丙酮化物Cholest-7-en-6-one,2,3,14,25-tetrahydroxy-20,22-[(1-methylethylidene)bis(oxy)]-, (2b,3b,5b,22R)-對照藥材 分 子 式: C30H48O7 分 子 量: 520.69792

APC6/CDC16  細胞分裂周期蛋白16抗體對葉百部堿Tuberostemonine中藥標準品  分 子 式: C22H33NO4 分 子 量: 375.50172

phospho-APC6/CDC16(Ser560)  磷酸化細胞分裂周期蛋白16抗體1,2-O-異亞丙基-beta-D-吡喃果糖(5S,8R,9R,10S)-2,2-Dimethyl-1,3,6-trioxaspiro[4.5]decane-8,9,10-triol對照藥材 分 子 式: C9H16O6 分 子 量: 220.21974

Borealin/CDCA8  細胞分裂周期蛋白8抗體柚皮素三甲醚5,7-Dimethoxy-2-(4-methoxyphenyl)chroman-4-one對照藥材 分 子 式: C18H18O5 分 子 量: 314.33252