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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

白曲霉Monkey MYBPC3 (Myosin Binding Protein C, Cardiac) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  candidus

黑曲霉Monkey CG (Chorionic Gonadotropin) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  niger

紅靈芝Monkey HB (Hemoglobin) ELISA Kit拉丁屬名: Ganoderma lucidum

米曲霉Monkey HLTF (Helicase Like Transcription Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  oryzae

干酪乳桿菌Monkey Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit 拉丁屬名: Lactobacillus  casei

屎腸球菌Monkey MYL9 (Myosin Light Chain 9, Regulatory) ELISA Kit用途: 環(huán)境除臭

大豆慢生根瘤菌Monkey HELIX-Ⅱ(Type Ⅱ Collagen Helical Peptide) ELISA Kit用途: 耐受pH4.5

皮爾瑞俄類芽孢桿菌Monkey Preptin ELISA Kit拉丁屬名: Paenibacillus peoriae

苜蓿中華根瘤菌Monkey PDI (Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit用途: 與苜蓿共生固氮

多殺性巴氏桿菌Monkey C5c (Complement C5 Convertase) ELISA Kit拉丁屬名: multocida

鐮刀菌Monkey LOXL4 (Lysyl Oxidase Like Protein 4 ) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃曲霉*Monkey FGFR1 (Fibroblast Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus flavus

*灰葡萄孢Monkey RNASEN (Ribonuclease III, Nuclear) ELISA Kit用途: 進行分析檢測及抗病性鑒定，指導(dǎo) 。

漫游孢囊菌屬Monkey FGF23 (Fibroblast Growth Factor 23) ELISA Kit拉丁屬名: Planosporangium mesophilum

枯草芽孢桿菌 BMonkey ApoC1 (Apolipoprotein C1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
豬等孢球蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商PLDL1/PLCE  磷脂酶C1樣蛋白抗體軟脂酸-β-香樹精酯Olean-12-en-3-ol,3-hexadecanoate, (3b)-對照藥材 分 子 式: C46H80O2 分 子 量:

CPXCR1  /睪丸抗原77抗體P:C(25:24,pH﹥7.8)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PLTP  磷脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體(20R)-原人參二醇Protopanaxadiol化學標準品 分 子 式: C30H52O3 分 子 量: 460.73

TM9SF4  跨膜蛋白9家族成員4抗體甘油三酯Trilaurin化學標準品 分 子 式: C15H30O4.2[C12H23O2-] 分 子 量: 673.01594

RDH13  視黃醇脫氫酶13抗體7-乙酸-5,7-二羥基雙氫黃酮酯(S)-5-Hydroxy-4-oxo-2-phenylchroman-7-yl acetate對照藥材 分 子 式: C17H14O5 分 子 量: 298.29006

NIMP/RTN4IP1  NOGO相互作用線粒體蛋白1抗體蒼術(shù)酮(4aS,8aR)-3,8a-Dimethyl-5-methylene-4,4a,5,6,7,8,8a,9-octahydronaphtho[2,3-b]furan中藥標準品  分 子 式: C15H20O 分 子 量: 216.3187

TMEM173  跨膜蛋白173抗體攀登魚藤異黃酮2H,6H-Benzo[1,2-b:5,4-b']dipyran-6-one,5-hydroxy-7-(4-hydroxyphenyl)-2,2-dimethyl-10-(3-methyl-2-buten-1-yl)-對照藥材 分 子 式: C25H24O5 分 子 量: 404.45506