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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

釀酒酵母Monkey MMP-11 (Matrix Metalloproteinase 11) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

蠟樣芽胞桿菌 (蠟狀芽胞桿菌)Monkey FGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  cereus

根瘤菌Monkey CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

季也蒙假絲酵母Monkey PKCθ (Protein Kinase C Theta )ELISA Kit 拉丁屬名: Candida  guilliermondii

病毒Monkey Surv (Survivin) ELISA Kit拉丁屬名: Infectious       bursal disease virus

芽孢桿菌屬Monkey ApoD (Apolipoprotein D) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  sp.

三葉草根瘤菌Monkey P-GP (Permeability Glycoprotein) ELISA Kit用途: 與白三葉草共生固氮

瓜亡革菌Monkey ADCY1 (Adenylate Cyclase 1, Brain) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

果生鏈核盤菌Monkey CA1 (Carbonic Anhydrase I) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

膠凍樣芽胞桿菌Monkey FLNα (Filamin A, Alpha) ELISA Kit用途: 細菌肥料

*珊瑚菌（不是這個菌）Monkey RNASEH (Ribonuclease H )ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

沃氏富鹽菌Monkey GUCA2A (Guanylate Cyclase Activator 2A) ELISA Kit拉丁屬名: Haloferax  volcanii

鏈霉菌Monkey FcγBP (Fc Fragment of IgG Binding Protein) ELISA Kit 用途: 代謝產(chǎn)物具有抗菌活性。

節(jié)桿菌屬Monkey ANG2 (Angiopoietin 2) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter  sp.

維多利亞維希尼克氏酵母Monkey PDE4D (Phosphodiesterase 4D, cAMP Specific) ELISA Kit拉丁屬名: Vishniacozyma victoriae
住白細胞原蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書MtTF1  線粒體轉(zhuǎn)錄因子1抗體D-核糖(2R,3R,4R)-2,3,4,5-Tetrahydroxypentanal碳水化合物  分 子 式: C5H10O5 分 子 量: 150.1299

BarX1  BarX1蛋白抗體蒼術(shù)苷鉀鹽19-Norkaur-16-en-18-oicacid, 15-hydroxy-2-[[2-O-(3-methyl-1-oxobutyl)-3,4-di-O-sulfo-b-D-glucopyranosyl]oxy]-,dipotassium salt, (2b,15a)- (9CI)中藥標準品  分 子 式: C30H44K2O16S2 分 子 量:

GOLPH2/GP73  高爾基體膜蛋白GP73抗體菖蒲酮Shyobunone中藥標準品  分 子 式: C15H24O 分 子 量: 220.4

phospho-CstF64(Ser83)  磷酸化細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體植酸Fytic acid中藥標準品  分 子 式: C6H18O24P6 分 子 量: 660.04

TET1/CXXC6  Ten-eleven轉(zhuǎn)運基因1蛋白抗體異阿魏酸2-Propenoic acid,3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-, (2E)-化學(xué)標準品 分 子 式: C10H10O4 分 子 量:

Calcium Sensing Receptor/CaSR  鈣敏感受體1抗體連翹酯苷EForsythoside E中藥標準品  分 子 式: C20H30O12 分 子 量: 462.445

DNA Polymerase beta  DNA聚合酶β抗體阿卡波糖acarbose中藥標準品  分 子 式: C25H43NO18 分 子 量: 645.61