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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

大腸埃希菌αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁屬名: coli

谷氨酸棒桿菌PRKG1 (Protein Kinase, cGMP Dependent Type I) ELISA Kit用途: 產賴氨酸菌株

鏈霉菌IGF-2 (Insulin Like Growth Factor 2) ELISA Kit 用途: 分類 研究

平臍儒孢菌F13 (Coagulation Factor ⅩⅢ) ELISA Kit用途: 研究

硬水黃桿菌δSIP-α (Delta Sleep Inducing Peptide α) ELISA Kit拉丁屬名: Flavobacterium  aquidurense

卷曲鏈霉菌NRP1 (Neuropilin 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

膠孢STAT5A (Signal Transducer and Activator of Transcription 5A) ELISA Kit 拉丁屬名: Colletotrichum gloeosporioides

SandarakinorhabdusBCDF (B-Cell Differentiation Factor)  ELISA Kit拉丁屬名: Sandarakinorhabdus  sp.

毛木耳MASP (Mannan Binding Lectin Associated Serine Protease) ELISA Kit拉丁屬名: Auricularia  polytricha

枯草芽孢桿菌HYOU1 (Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

馬賽菌MLZE (Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Massilia namucuonensis

大腸埃希氏菌PDGF (Platelet-Derived Growth Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia  coli

CaN (Calcineurin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母CPR (Cytochrome P450 Reductase) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

塔賓曲霉CDKN3 (Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 3) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus tubingensis
雷氏普羅威登斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒 AKT1 英文名稱： 蛋白激酶B 0.1ml

Anti-Bax protein/FITC 熒光素標記 Bax 蛋白IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

F VIII -Ag(Mouse coagulation factor VIII related antigen) ELISA Kit 小鼠凝血因子Ⅷ相關抗原Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-CD34/PE 熒光素PE標記CD34(細胞表面的唾液粘蛋白)IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DUSP1/MKP1 原活化蛋白激酶磷酸酶-1 規格 0.1ml

COX IgG II 柯薩奇病毒 IgG Ⅱ(間接法二步法)

MKS1 英文名稱： 梅克爾-格魯伯綜合征相關蛋白 0.2ml

Camk1g 英文名稱： 鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激酶IG 0.1ml

Anti-NQO1 醌氧化還原酶Multi-class antibodies規格： 0.2ml

anti-RV IgM(Human anti-rubella virus IgM antibody,anti-RV IgM) ELISA Kit 人IgMMulti-class antibodies規格： 48T

Anti-RKIP Raf激酶抑制蛋白Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HEATR7B2 熱休克蛋白受體家族蛋白7B2 規格 0.2ml

eNOS-3(Human Alpha1-Acid glycoprotein) ELISA Kit 人內皮型一氧化氮合成酶3 96T

PALB2 英文名稱： 癌易感基因相關蛋白2 0.1ml

CD155/PVR 英文名稱： 病毒受體 0.1ml

Anti-Phospho-Dab1 (Ser491) 磷酸化Disabled 1Multi-class antibodies規格： 0.1ml

IL-3 大鼠白介素-3Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-TNFRSF12A 壞死因子配體超家族成員12AMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NEK2 中心體相關蛋白激酶Nek2 規格 0.2ml

Human glycosylated serum protein,GSP ELISA Kit 人糖化蛋白 96T

TMEM59L 英文名稱： 跨膜蛋白59樣蛋白 0.2ml

CIDEB 英文名稱： CIDEB 0.2ml

Anti-Nonylphenol 任基酚Multi-class antibodies規格： 0.2mg

26S PSM(Human 26S proteasome) ELISA Kit 人26S蛋白酶體Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-NPM 核仁磷酸蛋白Multi-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IGSF5 免疫球蛋白超家族成員5 規格 0.2ml

TRH(Mouse thyrotropin-releasing hormone) ELISA Kit 小鼠促甲狀腺素釋放激素 96T

phospho-PIK3R1(Tyr467) 英文名稱： 磷酸化磷脂酰肌醇激酶 0.1ml