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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

產(chǎn)阿拉伯糖漢遜酵母Pro-MMP-13 (Pro-Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit拉丁屬名: Hansenula arabitolgenes

釀酒酵母CACYBP (Calcyclin Binding Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

大腸埃希氏菌TYR (Tyrosinase) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia  coli

戴爾根霉α1-AT (Alpha 1-Antitrypsin) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus  delemar

豇豆慢生根瘤菌CENPB (Centromere Protein B) ELISA Kit用途: 與花生共生固氮

復輪生小克銀漢霉HSP-60/HSPD1 (Heat Shock Protein 60) ELISA Kit拉丁屬名: Cunninghamella multiverticillata

馬鏈球菌馬亞種DCN (Decorin) ELISA Kit拉丁屬名: egui subsp.equi

大腸埃希氏菌MYH10 (Myosin Heavy Chain 10, Non Muscle) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

變幻青霉MVP (Major Vault Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium variabile

葡萄酒 總二氧化硫 拉丁屬名：葡萄酒 總二氧化硫 規(guī)格：350mL 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

費希爾曲霉 拉丁屬名：Aspergillus fischeri 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

頂生腐霉 拉丁屬名：Globisporangium acrogynum 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

薄層菌屬 拉丁屬名：Hymenobacter antarcticus 規(guī)格：凍干物 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分類；研究；教學 特征特性:革蘭氏陰性菌，細胞呈球形，無運動性，嚴格好氧，產(chǎn)紅色素，菌落形態(tài)為圓形，光滑，凸起，生長溫度為10到32度。 

沖擊地土地桿菌 拉丁屬名：Pedobacter alluvionis 規(guī)格：凍干物 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分類；研究；教學 特征特性:該菌株的形態(tài)呈桿狀，1.9－2.5 m × 0.63－０.83 m，革蘭氏反應陰性，不形成芽孢，不運動，以二分裂方式增殖。菌落形態(tài)為圓形，凸起，濕潤。生長溫度為9-32℃，最適生長溫度為25℃，最適生長pH為5.70-8.16。 

條斑病菌* 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Xanthomonas 種名加詞：oryzae pv. oryzicola

暗黃紫鏈霉菌 拉丁屬名：Streptomyces fulvoviolaceus 規(guī)格：凍干物 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:研究；教學 特征特性:菌絲纖細、無隔、多核、分枝，革蘭氏陽性，菌絲體發(fā)達，分化成基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，后者成熟后發(fā)育成孢子絲，可裂生大量分生孢子進行散播、繁殖。菌落小而致密、干而不透明，幼時表面光滑、邊緣整齊、顏色單調(diào)、不易挑起，繼而發(fā)展成絨毛狀、表面起粉、色澤豐富，正反面顏色往往不同。有較強的淀粉和蛋白質(zhì)水解能力(尤其是角蛋白)。 

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

布氏假單胞菌 拉丁屬名：Pseudomonas brenneri 用途：研究；分析檢測；AOC分析。 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

羊蹄甲長蠕孢 用途：研究 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 屬名：Helminthosporium 種名加詞：bauhiniae 模式菌株：非模式菌株 主要用途：a:1:{i:0;s:4:研究;} 特征特性：自然基質(zhì)上菌絲埋生，假子座大多埋生，暗褐色至黑褐色。分生孢子梗從子座表面單生或叢生，直或略彎曲，有隔，隔間距17－36μm，不分枝，近圓柱形，褐色至黑褐色，至頂端色澤漸淡，外壁光滑，高180-650μm，基部寬12－20μm，頂端寬8－10μm，頂端和上部1－4隔膜下側(cè)細胞壁上形成產(chǎn)孢孔。分生孢子通過小孔以內(nèi)壁芽生孔生(eb-tret)方式產(chǎn)生，分生孢子有喙倒棍棒形，直或彎，半透明至淺褐色，至頂端色澤漸淡，具9－15假隔膜，外壁光滑，長 63－85μm，最寬處寬13－21μm，頂端寬4－5μm，基部具有黑色，明顯突出，平截的，厚度2－4μm。 具體用途：研究

考克氏菌屬 拉丁屬名：Kocuria sp. 用途：研究； 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究 具體用途： 特征特性：菌落圓形，橙黃色，表面光滑、濕潤、邊緣整齊。 

漆斑菌 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 屬名：Myrothecium 種名加詞：cinctum

葡萄穗霉 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Stachybotrys 種名加詞：chartarum (Ehrenb.) S. Hughes 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究；教學 具體用途： 特征特性：分生孢子梗未成熟時無色，成熟后褐色，有分隔1-4個，當*個分生孢子梗成熟后（變褐色），在分生孢子梗最下面的分隔處再產(chǎn)生分生孢子梗；分生孢子梗上部褐色（從基部*個分隔往上），其上好似有凸起的顆粒物，下部近無色（從基部*個分隔往下）。分生孢子梗31-72×3.7-5.5µm，平均55.2×4.4µm。分生孢子梗比產(chǎn)生分生孢子梗的菌絲更粗。分生孢子梗頂端膨大體：無色到淡褐色，倒梨形，側(cè)面觀為4個，正面觀為8-9個，大小6.2-12.5×4.7-6.2µm，平均9.7×5

腫痂鏈霉菌 拉丁屬名：Streptomyces turgidiscabies 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

腸桿菌屬MCP-2/CCL8 (Monocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌BFP (Brain Finger Protein) ELISA Kit  拉丁屬名: Bacillus  subtilis

鉤狀木霉AFGF/FGF1 (Acidic Fibroblast Growth Factor 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

假單胞菌MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit用途: 微生物肥料

*櫻桃鏈格孢BMP-10 (Bone Morphogenetic Protein 10) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

紅硬囊果青霉PAI2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2 )ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium rubidurum
扇革蜱通用探針法熒光定量PCR試劑盒供應商CLIC2 英文名稱： 氯離子通道蛋白2 0.1ml

Anti-CYP1A1 細胞色素P450 1A1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

F III (Human coagulation factor III 0 ELISA Kit 人凝血因子ⅢMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-PH-4/P4H-TM 脯氨酸水解酶4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HDAC11 組蛋白去乙酰化酶11 規(guī)格 0.1ml

BetaGAL(Mouse Beta-galactosidase) ELISA Kit 小鼠β半乳糖苷酶 96T

Thrombin receptor 英文名稱： 蛋白酶激活受體-1 0.1ml

Carboxypeptidase A2 英文名稱： 羧肽酶A2 0.1ml

Anti-Nephrin 去氧腎上腺素Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

PPI(Human Peptidyl prolyl cis/trans isomerase) ELISA Kit 人肽基脯氨酰順反異構酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-nectin 2/CD112 細胞黏附分子CD112Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-26/AK155 白介素26 規(guī)格 0.2ml

MDC/CCL22 ELISA Kit 大鼠巨噬細胞來源的趨化因子 96T

phospho-P53(Ser46) 英文名稱： 磷酸化抑制基因P53 0.1ml

豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 英文名稱：guinea pig transforming growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit 特價促銷

phospho-Tau protein (pThr489) peptide 磷酸化微管相關蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-BrdU 溴脫氧尿苷Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Pectinesterase 果膠酶 規(guī)格 1ml

CD43 濃縮液 0.1ml 進口分裝

TSHR (CT) 英文名稱： 促甲狀腺素受體(C端) 0.1ml

Calpain 2 英文名稱： 鈣激活的中性蛋白酶2 0.1ml

CK3 英文名稱： 細胞角蛋白3 0.1ml

Anti-phospho-CaMK2 alpha (Thr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2αMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

sIL-2R 人可溶性白介素-2受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-c-Fos (Thr325) 磷酸化c-fosMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Nurr1 核受體相關因子-1 規(guī)格 0.1ml

Citrate buffer(1M pH6.0) 抗原熱修復試劑(100×濃縮液) 60ml

Phospho-TrkA(Tyr496) +TrkB(Tyr516) 英文名稱： 磷酸化酪酸激酶A 0.1ml