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客戶(hù)只需提供樣品和待檢測(cè)名稱(chēng)即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

枯草芽孢桿菌fT4 (Free Thyroxine) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

漢遜德巴利酵母FSH (Follicle Stimulating Hormone) ELISA Kit拉丁屬名: Debaryomyces hansenii

蜻蜓蟲(chóng)草GC (Glucagon) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

松口蘑（可訂購(gòu)）GnRH (Gonadotropin-Releasing Hormone) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

Bacillus methylotrophicusGCP-2 (Granulocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

猴頭HSP-27 (Heat Shock Protein 27) ELISA Kit用途: 試驗(yàn)栽培

多主葡萄殼菌HSP-40 (Heat Shock Protein 40) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

葡萄座腔菌HSP-60 (Heat Shock Protein 60) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

糙皮側(cè)耳HSP-70 (Heat Shock Protein 70) ELISA Kit拉丁屬名: Pleurotus ostreatus

變平滑假絲酵母HSP-90 (Heat Shock Protein 90) ELISA Kit拉丁屬名: Candida metapsilosis

*灰葡萄孢HSP GP96 (Heat Shock Protein Glycoprotein 96) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽胞桿菌HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  subtilis

考克氏菌屬Hepc (Hepcidin) ELISA Kit 拉丁屬名: Kocuria  sp.

水稻節(jié)桿菌hs-CRP (High Sensitivity C-Reactive Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter oryzae

果生鏈核盤(pán)菌HIF-1α (Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用
耐萬(wàn)古霉素腸球菌/雙重探針?lè)晒舛縋CR試劑盒說(shuō)明書(shū)Anti-STK/CK I Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記屬絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MST1R(Tyr1353) 磷酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶 規(guī)格 0.1ml

GLP-2(Glucagon-like peptide-2) 胰素樣肽-2(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

人受磷蛋白(PLN)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human phospholamban,PLN ELISA Kit進(jìn)口/分裝

人受體TNFRSF結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2(RIPK2)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：human receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2,RIPK2 ELISA Kit進(jìn)口/分裝

人受體酪氨酸激酶(RTKs)ELISA試劑盒 英文名稱(chēng)：Human receptor tyrosine kinase,RTKs ELISA Kit特價(jià)供應(yīng)

人瘦素(LEP)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Leptin，LEP ELISA Kit 特價(jià)促銷(xiāo)

CD168 英文名稱(chēng)： 透明質(zhì)酸介導(dǎo)細(xì)胞游走受體 0.1ml

Anti-Phospho-MARCKS (Ser162) 磷酸化丙氨酸蛋白激酶C底物MarcksMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit 人整合素連接激酶1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-NDRG1 (Ser330) 磷酸化分化相關(guān)基因NDRG1Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-4 (human) 白介素4(人) 規(guī)格 0.1ml

aPT1/aPT2(Human anti-prothrombins antibodies) ELISA Kit 人抗凝血素 96T

PRDM2 英文名稱(chēng)： 鋅指蛋白R(shí)IZ1 0.1ml

HSP47(Heat shock protein-47) 熱休克蛋白-47抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-phospho-c-Abl(Tyr245) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-AblMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-CHEK1 (Ser296) 磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1 規(guī)格 0.1ml

兔抗人IgG-F(ab)2 0.5ml 國(guó)產(chǎn)

WD SOCS box protein 2 英文名稱(chēng)： 信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白WD重復(fù)蛋白2 0.2ml

Phospho-Dab1 (Tyr220) 英文名稱(chēng)： 磷酸化Disabled 1 0.1ml

Anti-phospho-c-Abl(Tyr245) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-AblMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

CRHR2 英文名稱(chēng)： 促腎上腺皮質(zhì)釋放激素受體2 0.2ml

Anti-GRK2/BARK1 G蛋白偶合受體激酶2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

OSM(Human Oncostatin-M) ELISA KIT 人抑瘤素MMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-HPV 人類(lèi)狀瘤病毒Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MCK10/CD167a/DDR1 神經(jīng)上皮酪氨酸激酶(癌激酶10) 規(guī)格 0.1ml

TdT(Human terminal deoxynucleotidyl transferase) ELISA Kit 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 96T

RNF138 英文名稱(chēng)： 環(huán)指蛋白138 0.2ml