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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

平流層芽孢桿菌MUC6 (Mucin 6) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus stratosphericus

糞腸球菌CGβ (Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit拉丁屬名: Enterococcus  faecalis

紅球菌NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit拉丁屬名: Rhodococcus sp.

青霉屬NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium  sp.

布魯氏菌NOS3/eNOS (Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit拉丁屬名: abortus

藤黃微球菌F7 (Coagulation Factor VII) ELISA Kit拉丁屬名: Micrococcus  luteus

貪噬菌F9 (Coagulation Factor IX) ELISA Kit拉丁屬名: Variovorax boronicumulans

葉生布勒擔子酵母F10 (Coagulation Factor X) ELISA Kit拉丁屬名: Bulleribasidium foliicola

平菇F13 (Coagulation Factor XIII) ELISA Kit用途: 食用、藥用

范巴倫氏分支桿菌F12 (Coagulation Factor XII) ELISA Kit拉丁屬名: Mycobacterium  vanbaalenii

蘋果黑腐皮殼F5 (Coagulation Factor V/Plasma Factor V) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淺白隱球酵母F11 (Coagulation Factor XI) ELISA Kit 拉丁屬名: Cryptococcus albidus

大腸埃希氏桿菌COL2 (Collagen Type Ⅱ) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia  coli

蠟狀芽孢桿菌COL2α1 (Collagen Type II Alpha 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus cereus

魯氏接合酵母COL3α1 (Collagen Type III Alpha 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Zygosaccharomyces  rouxii
單端孢霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒供應商phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 英文名稱： 磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質/α-晶體蛋白b鏈 0.1ml

Anti-ART/FITC 熒光素標記膠質細胞系源性神經營養因子GDNF的一種IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

PSA(Mouse prostate specific antigen) ELISA Kit 小鼠特異性抗原Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-CD158b2/KIR2DL3/NKAT2a/FITC 熒光素標記NK細胞抑制性受體2DL3IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Donkey Anti-human IgG/RBITC 羅丹明標記的驢抗人IgG 規格 0.1ml

HBcAb(IgM) 核心 IgM 96T

MRGX1 英文名稱： G蛋白偶聯受體MRGX1 0.1ml

CCZ1 英文名稱： CCZ1蛋白 0.2ml

Anti-claudin 5 緊密連接蛋白-5Multi-class antibodies規格： 0.1ml

MMP-13(Human Matrix metalloproteinase 13) ELISA kit 人基質金屬蛋白酶13Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-OPN 骨橋蛋白(分泌型磷蛋白1)人Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh ICAM5/Telencephalin 細胞間粘附分子5 規格 0.1ml

TSH(Mouse Thyroid Stimulating Hormone)ELISA Kit 小鼠促甲狀腺素 96T

PCDH8 英文名稱： 原鈣粘附蛋白8 0.2ml

DNAH7 英文名稱： 軸絲動力蛋白7 0.2ml

Anti-beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Phospho-EEF2k (Ser359) 英文名稱： 磷酸化真核延伸因子激酶2 0.1ml

雄激素結合蛋白 Anti-ABP 0.1ml

Anti-WNK3 protein/FITC 熒光素標記絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK3IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Filamin A/FLNA (Ser2522) 磷酸化細絲蛋白A 規格 0.1ml

Claudin-11 peptide 少突膠質細胞跨膜蛋白抗原Multi-class antibodies規格： 0.5mg

CPSA(C2F9) 英文名稱： 復合特異性抗原單克隆 0.2ml

Anti-IFITM1/CD225 干擾素誘導跨膜蛋白1Multi-class antibodies規格： 0.1ml

P Gamma(Human Peptide Gamma) ELISA Kit 人γ肽Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-hHb 人血紅蛋白單克隆Multi-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MKRN1/RNF61 環指蛋白61 規格 0.2ml

GSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit 人糖原合成酶激酶 96T

Resistin 英文名稱： 抵抗素 0.1ml