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- 品牌：聯(lián)祖
- 產(chǎn)地：進口、國產(chǎn)
- 貨號：LZR85421
- 發(fā)布日期： 2020-11-23
- 更新日期： 2025-01-22
| 產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號 | LZR85421 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆A2204-12染料法qPCR試劑盒供應(yīng)商
貨號：LZR85421
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
產(chǎn)品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
需要注意：
PCR反應(yīng)液請在冰中配制，然后置于PCR反應(yīng)儀上進行PCR反應(yīng)。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。
二反應(yīng)的準(zhǔn)備：
待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應(yīng)：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
人28S抗核糖體抗體（28S rRNP）elisa分析檢測試劑盒DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (Alexa Fluor® 647 Conjugate)100 ul
人2 型次黃嘌呤核苷酸脫氫酶（IMPDH）（IMPDH2）elisa分析檢測試劑盒DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (Pacific Blue™ Conjugate)100 ul
人12-脂氧化酶/脂加氧酶（LOX-12）elisa分析檢測試劑盒Atg2A Antibody100 ul
人1,3-二磷酸甘油酸（1,3-DPG）elisa分析檢測試劑盒Phospho-Tau (Ser416) (D7U2P) Rabbit mAb20 ul
犬促甲狀腺素（TSH）elisa分析檢測試劑盒Phospho-Tau (Ser416) (D7U2P) Rabbit mAb100 ul
犬癌胚抗原（CEA）elisa分析檢測試劑盒Rad54 (D4W3Z) Rabbit mAb250 ml
牛唾液酸（SA）elisa分析檢測試劑盒Animal-Free Blocking Solution (5X)25 ml
雞補體蛋白4（C4）elisa分析檢測試劑盒Animal-Free Blocking Solution (5X)5 mg
雞（IB）抗體elisa分析檢測試劑盒DAPT5 mg
雞表皮生長因子（EGF）elisa分析檢測試劑盒Actinomycin D1 mg
大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體（ATGA/TGAB）elisa分析檢測試劑盒Carfilzomib100 ul
大鼠巨噬細胞蛋白1β（MIP-1β/CCL4）elisa分析檢測試劑盒His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul
大鼠堿性成纖維細胞生長因子6（bFGF-6）elisa分析檢測試劑盒ROS1 (D4D6®) Rabbit mAb (HRP Conjugate)100 ul
大鼠堿性成纖維生長因子（bFGF）elisa分析檢測試劑盒YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)100 ul
大鼠環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）elisa分析檢測試劑盒Neurofascin 186 (D6G6O) Rabbit mAb100 ul
大鼠紅細胞生成素（EPO）elisa分析檢測試劑盒Neurofascin 155 (D7B6O) Rabbit mAb20 ul
大鼠胱天蛋白酶7（CASP7）elisa分析檢測試劑盒Neurofascin 155 (D7B6O) Rabbit mAb100 ul
轉(zhuǎn)基因品系大豆A2204-12染料法qPCR試劑盒供應(yīng)商Streptococcus│egui subsp.equi分離基物: 馬頜下腺膿汁提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 科研及血清定型培養(yǎng)基: 396生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;
Phyllosticta│papayae Sacc.分離基物: 木瓜葉片提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 植物病原物，為該病防治提供依據(jù)培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Aspergillus│niger提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 134生長條件: 30℃存儲條件: 定期移植法；其他
Burkholderia│cenocepacia提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 能降解有毒大分子有機物，用于環(huán)境治理培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
Bacillus│cereus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 檢定菌培養(yǎng)基: CM0350生長條件: 37C存儲條件: 真空冷凍干燥
Gibberella│tricincta El-Gholl McRitchie Schoult. & Ridings分離基物: 朽木提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 植物病原物，用于該菌種群遺傳學(xué)研究培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Streptosporangium│sp.提供形式: 凍干物模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 分類學(xué)、及普通環(huán)境微生物的研究培養(yǎng)基: 38生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
Phanerochaete chrysosporium提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分解木質(zhì)素。培養(yǎng)基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件: 28℃，好氧存儲條件: 真空冷凍干燥法
Escherichia│coli提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 保存表達綠膿桿菌SecA蛋白N端236aa基因的基因工程細菌培養(yǎng)基: CM0033生長條件: 37C存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)
標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
