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- 品牌：聯(lián)祖
- 產(chǎn)地：進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
- 貨號(hào)：LZR85581
- 發(fā)布日期： 2020-11-24
- 更新日期： 2025-01-21
| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號(hào) | LZR85581 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系棉花281-25-236探針法qPCR試劑盒供應(yīng)商
貨號(hào)：LZR85581
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
需要注意：
PCR反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒信渲疲缓笾糜赑CR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）與熱啟動(dòng)法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)陽性對(duì)照和一個(gè)陰性對(duì)照。陽性對(duì)照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對(duì)照作為陽性對(duì)照，陰性對(duì)照是直接用 200μL 水作為陰性對(duì)照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個(gè)樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會(huì)抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分：成分 N 個(gè)樣品管 陰性對(duì)照 陽性對(duì)照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對(duì) 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對(duì)照（純化后） - 18 μL - 陰性對(duì)照（純化后） - - 18 μL電泳檢測(cè)
4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨(dú)加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會(huì)得到長(zhǎng)度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。
二反應(yīng)的準(zhǔn)備：
待各組份融化后先瞬時(shí)離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對(duì)照，測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應(yīng)：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個(gè)循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
蘆竹堿87-52-5實(shí)驗(yàn)方法M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAb20 ul
密蒙花苷20316-62-5實(shí)驗(yàn)步驟M-Cadherin (D4B9L) Rabbit mAb100 ul
綿馬酸ABA38226-84-5特價(jià)供應(yīng)THEX1 Antibody1000 ml
檸檬苦素1180-71-8實(shí)驗(yàn)步驟Tris-Glycine SDS Running Buffer (10X) 300 ul
松屬素480-39-7實(shí)驗(yàn)方法Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAb100 ul
人參皂苷Rg2 52286-74-5 價(jià)格Phospho-Akt (Ser473) (587F11) Mouse mAb100 ul
肉豆蔻木脂素171485-39-5價(jià)格THEX1 (D2B4) Rabbit mAb100 ul
石蒜堿476-28-8 價(jià)格PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAb20 ul
四氫小檗堿522-97-4價(jià)格PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAb100 ul
天麻素62499-27-8實(shí)驗(yàn)方法Phospho-Drosophila Akt (Ser505) Antibody100 ul
吳茱萸堿518-17-2特價(jià)供應(yīng)THEX1 (D66A11) Rabbit mAb300 ul
香葉木素520-34-3實(shí)驗(yàn)方法Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb100 ul
煙堿54-11-5實(shí)驗(yàn)步驟Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb300 ul
洋川芎內(nèi)酯I94596-28-8實(shí)驗(yàn)方法Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb100 ul
異綠原酸A2450-53-5價(jià)格Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb20 ul
異綠原酸C32451-88-0實(shí)驗(yàn)步驟Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb100 ul
原花青素 4852-22-6實(shí)驗(yàn)方法Akt3 Antibody100 ul
轉(zhuǎn)基因品系棉花281-25-236探針法qPCR試劑盒供應(yīng)商Pleurotus│nebrodensis分離基物: 朽木提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 食用菌培養(yǎng)基: 17生長(zhǎng)條件: 20℃存儲(chǔ)條件: 定期移植法
Erysipelothrix│rhuriopathiae分離基物: 豬提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 血清定性培養(yǎng)基: 396生長(zhǎng)條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;
Botryosphaeria│ribis Grossenb. & Duggar分離基物: 枝干提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25存儲(chǔ)條件: 定期移植法
Bacillus│thuringiensis Berliner提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 害蟲生物防治培養(yǎng)基: 141生長(zhǎng)條件: 28存儲(chǔ)條件: 定期移植法
Aspergillus│niger提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 以淀粉為原料 檸檬酸。培養(yǎng)基: CM0077生長(zhǎng)條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
Yersinia│pestis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0132生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
Thalassospira│lucentensis分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1.生物降解；2.生物催化；3.生物活性物質(zhì)篩選；4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 25℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
Stachybotrys│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)生Glauconic acid or Glaucanic acid培養(yǎng)基: CM0018生長(zhǎng)條件: 28C存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)
Escherichia│coli分離基物: 斑羚腸道提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分類學(xué)，形態(tài)研究，教學(xué)使用。培養(yǎng)基: 335生長(zhǎng)條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;
標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請(qǐng)分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對(duì)下面的洗脫步驟至關(guān)重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲(chǔ)于-20℃。
