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參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系棉花WideStrike染料法qPCR試劑盒供應(yīng)商

貨號：LZR85653

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

需要注意：

PCR反應(yīng)液請?jiān)诒信渲疲缓笾糜赑CR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）與熱啟動(dòng)法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。

PCR的反應(yīng)條件：

因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)陽性對照和一個(gè)陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個(gè)樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會(huì)抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）

3.樣品管：在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分：成分 N 個(gè)樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨(dú)加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會(huì)得到長度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。

二反應(yīng)的準(zhǔn)備： 　　

待各組份融化后先瞬時(shí)離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對照，測試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 　　

三、PCR反應(yīng)： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個(gè)循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。

人腎上腺髓質(zhì)素Elisa Kit品牌GAPDH (D4C6R) Mouse mAb (HRP Conjugate)100 ul

人酯轉(zhuǎn)移蛋白Elisa Kit品牌Rab9 (D22A6) Rabbit mAb100 ul

人晚期氧化蛋白產(chǎn)物Elisa Kit說明書RPL5 (D5Q5X) Rabbit mAb100 ul

小鼠β-防御素2Elisa Kit圖片RCC1 (D15H6) Rabbit mAb100 ul

小鼠γ-干擾素Elisa Kit說明書4E-BP1 Control Cell Extracts100 ul

小鼠睪酮Elisa Kit圖片β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)100 ul

青霉素鉀，1kg　進(jìn)口/原裝

青霉素鉀，25g　進(jìn)口/原裝

青霉素鏈霉素溶液，10ml　進(jìn)口/原裝

青霉素鏈霉素兩性霉素B溶液，10ml　進(jìn)口/原裝

青霉素鏈霉素新霉素溶液，10ml　進(jìn)口/原裝

土霉素，100g　進(jìn)口/原裝

土霉素，25g　進(jìn)口/原裝

土霉素，500g　進(jìn)口/原裝

土霉素，5g　進(jìn)口/原裝

鹽酸土霉素，100g　進(jìn)口/原裝

鹽酸土霉素，25g　進(jìn)口/原裝

鹽酸土霉素，500g　進(jìn)口/原裝

羅紅霉素，100g　進(jìn)口/原裝

羅紅霉素，25g　進(jìn)口/原裝

羅紅霉素，5g　進(jìn)口/原裝

伊曲康唑，1g　進(jìn)口/原裝

伊曲康唑，5g　進(jìn)口/原裝

氟康唑，100mg　進(jìn)口/原裝

氟康唑，1g　進(jìn)口/原裝

氟康唑，5g　進(jìn)口/原裝

阿莫西林，100g　進(jìn)口/原裝

阿莫西林，25g　進(jìn)口/原裝

阿莫西林，5g　進(jìn)口/原裝

酮康唑，1g　進(jìn)口/原裝

酮康唑，25g　進(jìn)口/原裝

酮康唑，5g　進(jìn)口/原裝

鹽酸洛美沙星，1g　進(jìn)口/原裝

鹽酸洛美沙星，5g　進(jìn)口/原裝

鹽酸克林霉素，100g　進(jìn)口/原裝

鹽酸克林霉素，25g　進(jìn)口/原裝

鹽酸克林霉素，5g　進(jìn)口/原裝

磷霉素鈉，1g　進(jìn)口/原裝

磷霉素鈉，25g　進(jìn)口/原裝

磷霉素鈉，5g　進(jìn)口/原裝

硫酸阿米卡星，1g　進(jìn)口/原裝

硫酸阿米卡星，250mg　進(jìn)口/原裝

硫酸阿米卡星，5g　進(jìn)口/原裝

阿米卡星，1g　進(jìn)口/原裝

阿米卡星，5g　進(jìn)口/原裝

莫能菌素鈉，1g　進(jìn)口/原裝

莫能菌素鈉，25g　進(jìn)口/原裝

四環(huán)素，25g　進(jìn)口/原裝

四環(huán)素，500g　進(jìn)口/原裝

頭孢曲松鈉，25g　進(jìn)口/原裝

頭孢曲松鈉，5g　進(jìn)口/原裝

頭孢唑啉鈉，25g　進(jìn)口/原裝

頭孢唑啉鈉，5g　進(jìn)口/原裝

嘌呤霉素鹽酸鹽，100mg　進(jìn)口/原裝

嘌呤霉素鹽酸鹽，25mg　進(jìn)口/原裝

多粘菌素B硫酸鹽，100mg　進(jìn)口/原裝

多粘菌素B硫酸鹽，1g　進(jìn)口/原裝

多粘菌素B硫酸鹽，25g　進(jìn)口/原裝

多粘菌素B硫酸鹽，5g　進(jìn)口/原裝

多粘菌素E硫酸鹽，1g　進(jìn)口/原裝

多粘菌素E硫酸鹽，25g　進(jìn)口/原裝

多粘菌素E硫酸鹽，5g　進(jìn)口/原裝

鏈霉素硫酸鹽，100g　進(jìn)口/原裝

鏈霉素硫酸鹽，25g　進(jìn)口/原裝

鏈霉素硫酸鹽，500g　進(jìn)口/原裝

鹽酸萬古霉素，100mg　進(jìn)口/原裝

鹽酸萬古霉素，1g　進(jìn)口/原裝

鹽酸萬古霉素，5g　進(jìn)口/原裝

鹽酸壯觀霉素，100g　進(jìn)口/原裝

鹽酸壯觀霉素，25g　進(jìn)口/原裝

鹽酸壯觀霉素，5g　進(jìn)口/原裝

乙酰水楊酸，100g　進(jìn)口/原裝

乙酰水楊酸，250g　進(jìn)口/原裝

乙酰水楊酸，500g　進(jìn)口/原裝

阿奇霉素，100g　進(jìn)口/原裝

阿奇霉素，25g　進(jìn)口/原裝

阿奇霉素，5g　進(jìn)口/原裝

硝酸咪康唑，25g　進(jìn)口/原裝

硝酸咪康唑，5g　進(jìn)口/原裝

鹽酸強(qiáng)力霉素，100g　進(jìn)口/原裝

鹽酸強(qiáng)力霉素，25g　進(jìn)口/原裝

鹽酸強(qiáng)力霉素，500g　進(jìn)口/原裝

鹽酸強(qiáng)力霉素，5g　進(jìn)口/原裝

苯唑西林鈉，10g　進(jìn)口/原裝

苯唑西林鈉，25g　進(jìn)口/原裝

苯唑西林鈉，5g　進(jìn)口/原裝

哌拉西林鈉，100g　進(jìn)口/原裝

哌拉西林鈉，1g　進(jìn)口/原裝

哌拉西林鈉，250mg　進(jìn)口/原裝

哌拉西林鈉，25g　進(jìn)口/原裝

哌拉西林鈉，5g　進(jìn)口/原裝

萘啶酮酸，1g　進(jìn)口/原裝

萘啶酮酸，25g　進(jìn)口/原裝

磺胺嘧啶鈉，5g　進(jìn)口/原裝

5-氟胞嘧啶，1g　進(jìn)口/原裝

5-氟胞嘧啶，250mg　進(jìn)口/原裝

5-氟胞嘧啶，25g　進(jìn)口/原裝

5-氟胞嘧啶，5g　進(jìn)口/原裝

馬來酸羅格列酮，1g　進(jìn)口/原裝

馬來酸羅格列酮，500mg　進(jìn)口/原裝

馬來酸羅格列酮，5g　進(jìn)口/原裝

新生霉素，1g　進(jìn)口/原裝

新生霉素，250mg　進(jìn)口/原裝

新生霉素，5g　進(jìn)口/原裝

匹馬霉素，1g　進(jìn)口/原裝

匹馬霉素，5g　進(jìn)口/原裝

磺胺甲噁唑，1g　進(jìn)口/原裝

磺胺甲噁唑，25g　進(jìn)口/原裝

磺胺甲噁唑，5g　進(jìn)口/原裝

鹽酸阿霉素，25mg　

小鼠肌鈣蛋白IElisa Kit*錢TIAR Antibody500 ul

小鼠腦源性神經(jīng)生長因子Elisa Kit說明書SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers100 ul

小鼠緊張素II受體2Elisa Kit說明書Cyclophilin A (D2Y4M) Rabbit mAb1 Kit

小鼠葉酸受體Elisa Kit圖片Loading Control Antibody Sampler Kit1 Kit

柱式昆蟲 RNAout50 次說明書MYPT1 Antibody Sampler Kit100 ul

磁珠血液 DNAout50 次品牌HGK (D19H10) Rabbit mAb100 ul

豬表皮生長因子（EGF）elisa分析檢測試劑盒SRF (D71A9) XP® Rabbit mAb20 ul

小鼠絲氨酸轉(zhuǎn)肽酶抑制劑Kazal type 3（SPINK3）elisa分析檢測試劑盒SRF (D71A9) XP® Rabbit mAb500 ul

小鼠凝血因子XIII A1（F13A1）elisa分析檢測試劑盒SimpleChIP® Human TAP1 Promoter Primers100 ul

小鼠免疫球蛋白M（IgM）elisa分析檢測試劑盒DUSP4/MKP2 (D9A5) Rabbit mAb100 ul

小鼠免疫球蛋白D（IgD）elisa分析檢測試劑盒Anti-rabbit IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjugate)500 ul
轉(zhuǎn)基因品系棉花WideStrike染料法qPCR試劑盒供應(yīng)商Alternaria│brassicae (Berk.) Sacc.分離基物: 葉片病斑提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25-27存儲(chǔ)條件: 定期移植法

Trametes│sanguinea提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃

Idiomarina│sediminum分離基物: 生物樣/淺水貝類提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 共附生微生物/貝類共生菌培養(yǎng)基: 472生長條件: 25℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Escherichia│coli提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 保存HIV-1基因，載體pSVC21，蛋白酶失活，Vif失活培養(yǎng)基: CM0033生長條件: 37C存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)

Acinetobacter│lwoffii分離基物: 砂土提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Monascus│pilosus分離基物: 丟糟提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀酒。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Torulopsis│mogii分離基物: 稀醪提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 醬油生香培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 25-28存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

枯草芽孢桿菌種屬: Bacillus│subtilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 淀粉酶。培養(yǎng)基: CM0101生長條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Bacillus│smithii分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 50℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：

產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。

7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；

15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲(chǔ)于-20℃。