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上海聯(lián)祖生物科技有限公司
產(chǎn)品展廳
轉基因元件E9’終止子染料法qPCR試劑盒供應商
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:進口、國產(chǎn)
  • 貨號:LZR86037
  • 發(fā)布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2025-01-17
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進口、國產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號 LZR86037
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號
是否進口

標準操作步驟:

產(chǎn)品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質(zhì);這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。

參數(shù)規(guī)格:

產(chǎn)品名稱:轉基因元件E9’終止子染料法qPCR試劑盒供應商

貨號:LZR86037

產(chǎn)品規(guī)格:50次

產(chǎn)品運輸:低溫運輸

產(chǎn)品保存:-20℃保存

產(chǎn)品有效期:一年

產(chǎn)品特點:

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環(huán):94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個循環(huán)開始,每循環(huán)退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環(huán)開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環(huán)32次;循環(huán)結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

 

 

產(chǎn)品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
咪莫特英文名稱:Itraconazole人內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒規(guī)格:100mg保存:-20℃,避光

咪唑英文名稱:Imidazole人病毒前S2抗原(HBV preS2Ag)ELISA試劑盒規(guī)格:50mg保存:-20℃,避光

咪唑試劑英文名稱:Imidazole reagent大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒 規(guī)格:100克保存:-20℃,避光

咪唑斯汀英文名稱:Mizolastine人卷曲蛋白8(FZD8)ELISA試劑盒規(guī)格:100mg保存:-20℃,避光

迷迭香英文名稱:Rosmarinic acid小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光

米力農(nóng)英文名稱:Milrinone人質(zhì)裂解素(ST2)ELISA試劑盒 規(guī)格:100mg保存:-20℃,避光

米諾地爾英文名稱:Minoxidil人細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格:100mg保存:-20℃,避光

米諾環(huán)素英文名稱:Minocycline大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒規(guī)格:100mg保存:-20℃,避光

密蒙花英文名稱:Buddleia大鼠嗜粒細胞趨蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA試劑盒 規(guī)格:0.5g保存:-20℃,避光

蜜環(huán)菌粉英文名稱:Armillaria powder人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA試劑盒規(guī)格:1g保存:-20℃,避光

綿萆薢英文名稱:Dioscorea septemloba Thunb大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒規(guī)格:2g保存:-20℃,避光

綿大戟英文名稱:Mian Daji大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒規(guī)格:0.1g保存:-20℃,避光

綿馬貫眾英文名稱:Dryopteris crassirhizoma人2,3-二磷甘油(2,3-DPG)ELISA試劑盒規(guī)格:1g保存:-20℃,避光

綿馬ABA英文名稱:Filixic acid ABA豚鼠α(TNF-α)ELISA試劑盒規(guī)格:HPLC≥98% 10mg/支保存:-20℃,避光

棉英文名稱:Gossypol人單純病毒Ⅰ型抗體(HSVⅠAb)ELISA試劑盒規(guī)格:20mg保存:-20℃,避光

Di(propylene glycol) methyl ether, mix...小鼠胃蛋白酶(Pepsin) 進口/國產(chǎn)

Diphenyl sulfide,98%大鼠胃蛋白酶(Pepsin) 進口/國產(chǎn)

Phenyl propargyl ether,≥90%人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB) 進口/國產(chǎn)

4-Iodoanisole,98%小鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB) 進口/國產(chǎn)

4-Iodophenetole,97%大鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB) 進口/國產(chǎn)

β-Bromophenetole,98%人胰蛋白酶原激活肽(TAP) 進口/國產(chǎn)

4-(Trifluoromethoxy)iodobenzene,97%小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP) 進口/國產(chǎn)

Benzo-15-crown-5,98%大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP) 進口/國產(chǎn)
轉基因元件E9’終止子染料法qPCR試劑盒供應商Arthrobacter│sp.分離基物: 土樣/生活區(qū)土樣提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質(zhì)篩選;4.海洋微生物生態(tài)學研究。培養(yǎng)基: 472生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Candida│guilliermondii提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Streptococcus loxodontisalivarius Saito et al. 2014模式菌株: 未知

Pseudomonas│putda分離基物: 土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no應用領域: 檢測 培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30-37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Bacillus│subtilis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產(chǎn)肌苷酸。培養(yǎng)基: CM0103生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法

Bacillus│thuringiensis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 能產(chǎn)生殺蟲晶體蛋白和其他殺蟲毒素,用于科研和開發(fā)生物農(nóng)藥。培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法

Aspergillus│flavus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 定期移植法

蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Erysipelothrix│rhuriopathiae分離基物: 豬提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 研究培養(yǎng)基: 396生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;


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