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上海聯(lián)祖生物科技有限公司
產(chǎn)品展廳
轉(zhuǎn)基因構(gòu)建FMV啟動子-PLRY基因PCR試劑盒說明書
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:進口、國產(chǎn)
  • 貨號:LZR86142
  • 發(fā)布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2025-01-17
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進口、國產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號 LZR86142
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號
是否進口

產(chǎn)品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

參數(shù)規(guī)格:

產(chǎn)品名稱:轉(zhuǎn)基因構(gòu)建FMV啟動子-PLRY基因PCR試劑盒說明書

貨號:LZR86142

產(chǎn)品規(guī)格:50次

產(chǎn)品運輸:低溫運輸

產(chǎn)品保存:-20℃保存

產(chǎn)品有效期:一年

產(chǎn)品特點:

產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

 

需要注意:

PCR反應(yīng)液請在冰中配制,然后置于PCR反應(yīng)儀上進行PCR反應(yīng)。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結(jié)合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng),增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結(jié)果。

PCR的反應(yīng)條件:

因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。

二反應(yīng)的準(zhǔn)備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應(yīng):   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環(huán):94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個循環(huán)開始,每循環(huán)退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環(huán)開始,反應(yīng)條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

標(biāo)準(zhǔn)操作步驟:

產(chǎn)品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復(fù)到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉(zhuǎn)速(>13000×g)離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì);這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
40%Acrylamide/Bisacrylamide(37.5:1) 含量:暫不提供 規(guī)格:1ml,3ml

過銨APS 含量:暫不提供 規(guī)格:50次,200次

Ammonium persulfate 含量:暫不提供 規(guī)格:50μl,250μl

抗熒光衰減封片劑(強) 含量:暫不提供 規(guī)格:50μl,250μl

Antifade Mounting Medium 含量:暫不提供 規(guī)格:20次,50次

細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒 含量:暫不提供 規(guī)格:20次,50次

Apoptosis and Necrosis Assay Kit 含量:暫不提供 規(guī)格:50次,100次

細(xì)胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒 含量:暫不提供 規(guī)格:50次,100次

酰白藜蘆;Acetyltrans CAS號: 42206940 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

羊藿次苷II;Icarisid II CAS號: 113558159 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

茵芋苷;Skimmin CAS號: 93390 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

亞油;Methyl Linolea CAS號: 112630 規(guī)格: 100mg 訂購|咨詢

;Methyl Oleate CAS號: 112629 規(guī)格: 100mg 訂購|咨詢

硬脂;Methyl Stearat CAS號: 112618 規(guī)格: 50mg 訂購|咨詢

酰蒲公英萜;Taraxeryl ac CAS號: 2189802 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

異古倫賓;IsocoluMbin CAS號: 471545 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

吲哚;6Hydroxyindole CAS號: 2380861 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

原七葉皂苷元;Protoaescigen CAS號: 20853070 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

鹽吐根;EMetine Hydroc CAS號: 316427 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

氧血根堿;Ethoxysanguin CAS號: 28342316 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

遠(yuǎn)華蟾蜍精;Telocinobufagi CAS號: 472264 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

氧槐定堿;Oxysophoridine CAS號: 54809744 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

薏苡素;Coixol CAS號: 532912 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

N,N′-Diphenylthiourea,98%大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10) 進口/國產(chǎn)

2-Imidazolidinetione,≥98.0%人凝溶膠蛋白(Gelsolin) 進口/國產(chǎn)

Allyl thiourea,98%小鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin) 進口/國產(chǎn)

N-Phenylurea,97%大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin) 進口/國產(chǎn)

Aminourea hydrochloride,≥99%人結(jié)蛋白(Des) 進口/國產(chǎn)

Tetramethylurea,99%小鼠結(jié)蛋白(Des) 進口/國產(chǎn)

Acetone semicarbazone,97%大鼠結(jié)蛋白(Des) 進口/國產(chǎn)

Thiurea dioxide,≥98%人心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4  進口/國產(chǎn)
轉(zhuǎn)基因構(gòu)建FMV啟動子-PLRY基因PCR試劑盒說明書Alcanivorax│venustensis分離基物: 沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物(21-25cm)提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養(yǎng)基: 821生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Azotobacter│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 固氮。培養(yǎng)基: 3生長條件: 28-30存儲條件: 定期移植法

Rhizoctonia│solani提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于水稻紋枯病菌的多樣性研究培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Aspergillus│niger提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 定期移植法

Acremonium│sp.分離基物: 水樣/下層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 大洋絲狀真菌培養(yǎng)基: 475生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Lentinula│edodes提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法

Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀造葡萄酒。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法

Penicillium│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 生理活性物質(zhì);退行性疾病培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)

Verticillium│dahliae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃


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