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傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。

細(xì)胞名稱 紅色熒光蛋白標(biāo)記的人細(xì)胞；A549-tdT

形態(tài)特性: 上皮樣

生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)

特征特性: 通過慢病毒感染的方式使A549細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)紅色熒光蛋白TdT，后經(jīng)流式分選獲得的TdT陽性細(xì)胞群。

培養(yǎng)條件: McCoy＇s5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS

傳代方法: 1:3~1：8傳代；每周2~3次。

傳代情況:

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

注意事項(xiàng)：

1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類試劑產(chǎn)品，嚴(yán)禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

AIFELISAKit大鼠凋亡誘導(dǎo)因子  規(guī)格：5mg  

dsDNAELISAKit大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體  規(guī)格：200mg  

MHC-II/H-2II(Mousemajorhistocompatibilitycomplex-II)ELISAKit小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類  規(guī)格：1.5g  

MIF(HumanMacrophageMigrationInhibitoryFactor)ELISAKit人巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子  規(guī)格：100mg  

TFPIHumanTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit人組織因子途徑抑制物  規(guī)格：100mg/支  

sEPCR(MousesolubleendothelialproteinCreceptor)ELISAKit小鼠可溶性內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體  規(guī)格：100mg  

ALPELISAKit大鼠堿性磷酸酶  規(guī)格：1ml  

ADAMTS13/vWF-cpELISAKit大鼠性因子裂解蛋白酶  規(guī)格：100mg  

MECF(ouseeosinophilchemotacticfactor)ELISAKit小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子  規(guī)格：1ml  

IP-10/CXCL10(Humaninterferon-inducibleprotein10)ELISAKit人干擾素誘導(dǎo)蛋白10  規(guī)格：50mg  

IL-1(HumanInterleukin1)ELISAKit人白介素1  規(guī)格：50mg  

ANG-4ELISAKit大鼠生成素4  規(guī)格：20mg  

Eotaxin1/CCL11(MouseEotaxin1)ELISAKit小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白  規(guī)格：2g  

IL-17(HumanInterleukin17)ELISAKit人白介素17  規(guī)格：100mg  

E-Selectin/CD62E(MouseE-Selectin)ELISAkit小鼠E選擇素  規(guī)格：100mg  
紅色熒光蛋白標(biāo)記的人細(xì)胞；A549-tdT供應(yīng)商高麗槐素19908-48-6中文別名：馬卡因  

英文名：Maackiain  

英文別名：dl-Maackiain  

CAS登錄號(hào)：19908-48-6

分子式：C16H12O5

分子量：284.26

分子結(jié)構(gòu)：

外觀：無色針狀結(jié)晶（）

規(guī)格：20mg/支

純度：≥ 98%

用途：用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等

提取來源：豆科植物高麗槐的根

熔點(diǎn)：180-182℃

旋光度：-260°(c1.0,)，-205°（c0.25，）

：很強(qiáng)的作用。

貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年