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免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：

一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。

2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其完全覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
別 名 Cardioacceleratory peptide 2a; CCAP; CG4910; Crustacean cardioactive peptide; DmCCAP.

純化方法 affinity purified by Protein A

儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Soium zde, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:50-200 

英文名稱(chēng) Anti-CCAP/Cardioactive Peptide

中文名稱(chēng) 心動(dòng)加速蛋白多肽抗體

濃 度 1mg/1ml

規(guī) 格 0.2ml/200μg

抗體來(lái)源 Rabbit

克隆類(lèi)型 polyclonal

交叉反應(yīng) Fruit Fly

產(chǎn)品類(lèi)型 一抗

研究領(lǐng)域 心 神經(jīng)生物學(xué)

蛋白分子量 predicted molecular weight: 18kDa

性 狀 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from Fruit fly Cardioactive Peptide

亞 型 IgG

抗體的制備過(guò)程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動(dòng)物：常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量 時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血，家兔、山羊、綿羊可采用采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。聯(lián)祖保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無(wú)載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過(guò)濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見(jiàn)。

全碳標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Perflubron   CAS:423552

己可可標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Pentoxifylline   CAS:1677687

標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Pentobarbital CII  CAS:76744

噴替標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Pentetic Acid  CAS:67436

噴他標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Pentazocine CIV  CAS:359831

標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Pentane  CAS:109660

依西噴他脒標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Pentamidine Isethionate  CAS:140647

青霉素V標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillin V Potassium   CAS:132989

青霉素V標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillin V   CAS:31990

青霉素標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillin G Sodium   CAS:69578

普魯卡青霉素標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillin G Procaine  CAS:6130649

青霉素標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillin G Potassium   CAS:113984

芐星青霉素標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillin G Benzathine   CAS:41372025

二青霉標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillamine Disulfide   CAS:20902458

青霉標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱(chēng)：Penicillamine  CAS:52675

氧銨鎢水合物  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Ammoniumtungstenoxidehydrate  含量:AR，97%

氧鉺(III)  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Erbium(III)oxide  含量:AR，98%

氧二銀  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Silveroxide  含量:特純，97%

氧高鈷  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Cobalt(III)oxide  含量:CP，98%

氧高金  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Goldoxide  含量:AR，99%

氧鉻  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Chromium(III)oxide  含量:BR，99%

氧鈷  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Cobalt(II,III)oxide  含量:CP

氧硅(II)  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Siliconmonoxide  含量:AR，98%

氧槐定  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Oxysophoridine  含量:BR，98%

氧槐果  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Oxysophocarpine  含量:BR，98%
心動(dòng)加速蛋白多肽抗體0.2ml/200μgHerba pogostemonis廣藿香PCR鑒定試劑盒   質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定 16652-71-4

Ramulus cinnamomi桂枝PCR鑒定試劑盒    質(zhì)量規(guī)格：>98%,水合物 4320-30-3

Spora lygodii海金沙PCR鑒定試劑盒   質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 5256-76-8

Endoconcha sepiae海螵蛸PCR鑒定試劑盒  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 28798-28-9

Sargassum海藻PCR鑒定試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR，可用于細(xì)胞培養(yǎng) 71989-43-0

溴化鎘  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Cadmiumbromide  含量:2N，200目

溴化銫  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Cesiumbromide  含量:BR，95%

溴化十四烷基三甲基銨  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):TTAB  含量:AR，粉末

溴化四庚銨  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Tetraheptylammoniumbromide  含量:4N，99.8%

溴化四甲基銨  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):TMAB  含量:AR，99%

溴化四乙銨  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):TMD-10  含量:AR，99.8%

溴化铔  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Ammoniumbromide  含量:AR，99.8%

溴化乙啶  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):EB  含量:高純

溴化銀  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):Silverbromide  含量:AR，98%

溴甲酚紅  進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  英文名稱(chēng):BCP  含量:BR，99%