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CHO 殘留 DNA 檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)試劑盒簡介：

CHO 殘留DNA 檢測試劑盒是用于定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成 品中殘留的 CHO  宿主細胞 DNA。
本試劑盒利用 Taqman 探針法， 定量檢測樣本中 CHO  殘留 DNA。該方法具有速度快、 特異性高、  性能可靠且 檢測限可達到 fg 級別。
試劑盒組份：

表 1：試劑盒組份

試劑 裝量 貯存條件
CHO control DNA 40ul×1 管 -20oC
DNA dilution buffer 6ml ×1 瓶 -20oC
2×Taqman master mix (+UNG/ROX) 0.75ml ×2 管 -20oC
10×CHO qPCR mix 0.3ml ×1 管 -20oC
RNase-Free H2O 1.5ml×1 管 -20oC
規(guī)格 ：100  反應(yīng)
適用機型：
PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)
StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)
LightCycler 480 (Roche)
AriaMX (Agilent Technologies)
CFX (BIO-RAD)

實驗所需但試劑盒未包含材料：

? 1.5ml 無菌低吸附離心管
? 96 孔 qPCR  板
? 一次性手套
? 1000ul 、100ul 、10ul 無菌低吸附帶濾芯移液槍頭

相關(guān)設(shè)備：
?  離心機
? 渦旋振蕩器
? 熒光定量 PCR 儀

? 1000ul 、100ul 、10ul 移液器

qPCR 程序參數(shù)設(shè)置(以 ABI 7500 為例)：

1.創(chuàng)建空白新程序，選擇 定量檢測模塊。
2.創(chuàng)建新檢測探針，命名為 CHO-DNA，選擇報告熒光基團為 FAM，淬滅基團為 none,檢測 參比熒光為 ROX。
3.設(shè)置兩步法反應(yīng)程序： 50oC 2min, 95oC 預變性 10min；95oC 10 sec，60oC 1min，40 個循環(huán)； 反應(yīng)體積為 30ul。
qPCR 結(jié)果分析(以 ABI 7500 為例)
1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中， 將 Threshold 設(shè)置為 0.05 ，點擊 Analyze，此時可 初步查看擴增曲線的形態(tài)是否正常。
2.在 Results  的 Plate 面板中，將標準曲線孔的 Task 一欄設(shè)置為 Standard，并且在 Quantity 一欄分別賦值為 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03  (含義為每孔的 DNA 量， 單位為 pg)， 并且
在相應(yīng)的 Sample Name 一欄命名為 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。
3.在 Results 的 Plate 面板中，將無模板對照 NTC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 NTC，將陰性質(zhì)控 NEG 孔、待測樣本孔、樣本 ERC 孔的 Task 一欄設(shè)置為