|
| 產(chǎn)地 | |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號 | |
| 用途 | |
| 包裝規(guī)格 | |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
試劑盒簡介：
宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(磁珠法)用于樣本的前處理，可穩(wěn)定高效地提 取出樣本中殘留的痕量宿主 DNA。
試劑盒組分：
序號 試劑 規(guī)格 儲存條件
1 裂解液 15ml×1 瓶
室溫
結(jié)合液(異丙醇) 空瓶
洗滌液 40ml×2 瓶
樣本稀釋液 15ml×1 瓶
5M NaCl 1ml×1 管
蛋白酶 K 1ml×1 管
磁珠 6ml×1 瓶
洗脫液 10ml×1 瓶
2 肝糖原 1ml×1 管 -20oC
tRNA 50ul×1 管
有效期： 12 個月
實驗所需但試劑盒未包含成分：
? 無水乙醇
? 異丙醇
? 一次性手套
? 1.5ml 離心管
? PCR 管
? 1000ul 、100ul 、10ul 無菌濾芯低吸附移液槍頭
相關(guān)設(shè)備：
? 離心機
? 渦旋振蕩器
? 旋轉(zhuǎn)混勻器
? 磁力架
? 恒溫水浴鍋或金屬浴
? 1000ul 、100ul 、10ul 、2.5ul 移液器
實驗操作細則：
一、 樣本處理：
1. 取 100ul 待檢樣本至 1.5ml 干凈的離心管中，加入 10ul 5M NaCl 溶液，用渦旋 振 蕩器充分震蕩 10 秒；
2. 加入 10ul 蛋白酶 K，在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒；
3. 配制新鮮的裂解液，其組成為： 130ul 裂解液/100ul 樣本， 9ul 肝糖原/100 樣本， 0.2ul tRNA/100ul 樣本，充分混勻以制成新鮮配制的裂解液；
4. 將 139ul 新鮮配制的裂解液加入到樣本管中， 然后用渦旋振蕩器充分震蕩 10 秒， 取出短 暫快速離心 5 秒，然后放置在 56oC 孵育 30 分鐘；
二、 DNA 捕獲：
1. 將磁珠充分渦旋振蕩以完全重懸；
2. 將樣本管從孵育器中取出， 進行簡短的離心，將液體收集到管底，然后加入完全重懸的 磁珠 60ul 和 230ul 結(jié)合液，在渦旋振蕩器上充分震蕩 10 秒； (注意： 在加入磁珠時， 需經(jīng) 常振蕩重懸磁珠， 以保證吸取時磁珠的均勻性。建議每加 3-4 組樣本后， 重懸磁珠后再進行 后續(xù)樣本的添加)
3. 將震蕩后的樣本管，置于旋轉(zhuǎn)混勻器或渦旋振蕩器上 10 分鐘以進行磁珠捕獲；
4. 將樣本管從旋轉(zhuǎn)混勻器上取下，在 10000g 的條件下離心 1 分鐘使磁珠充分聚集；
5. 將離心后的樣本管置于磁力架上， 待溶液完全澄清后， 用槍頭小心移去上清(注： 避免 槍頭攪動磁珠，使得磁珠同上清一起被除去從而影響得率)；
三、 洗滌：
1. 樣本管移去上清后，不必將樣本管從磁力架上取下，直接加入 400ul 洗滌液；
2. 待溶液完全澄清后，磁珠完全分離，用槍頭小心移去上清；
3. 保持樣本管在磁力架上， 加入 400ul 洗滌液， 待溶液澄清， 磁珠完全分離后， 用槍頭小 心移去上清；
4. 將樣本管從磁力架上取下， 于 10000g 的條件下離心 30 秒，使得殘留的洗滌液完全聚集 到管底；
5. 將樣本管置于磁力架上，待磁珠完全分離后，用 10ul 槍頭小心移除殘留的液體；
6. 將樣本管從磁力架上取下，置于 70oC 金屬浴中，放置 4 分鐘， 除去殘留的乙醇(注： 若干燥不夠， 殘留的乙醇會影響后續(xù)的定量檢測反應(yīng))；待磁珠團出現(xiàn)裂紋時，將樣本管從 金屬浴中取出進行 DNA 洗脫；
四、 DNA 洗脫：
1. 沿著樣本管的管壁加入 50- 100ul 洗脫液，用 100ul 的槍頭反復(fù)吹吸，以完全重懸磁珠；
2. 將樣本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分鐘；
3. 將樣本管從孵育器中取出，于 20000g 離心 2 分鐘，然后至于磁力架上，待磁珠完全分 離后，用 10ul 槍頭小心將上清液體轉(zhuǎn)移至新的干凈的離心管中；
4. 為了避免吸入磁珠，在離心管中還剩余少量液體時，將其于 20000g 離心 2 分鐘，然后 至于磁力架上以吸出剩余的液體。
注意事項：
1. 在結(jié)合操作時請確保磁珠與樣本充分混勻，建議使用混勻儀或渦旋振蕩器。
2. 洗滌操作后如果管底殘留有液體，請再次短暫離心后放于磁力架磁性分離，用小槍頭吸 出洗滌液。
3. 每次操作請勿吸出磁珠，保證磁珠加入后一直在管中，只操作上清。
