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人抗細胞膜DNA抗體(cmDNA)elisa定量檢測試劑盒樣本處理及要求
發表時間:2024-09-20
人抗細胞膜DNA抗體(cmDNA)elisa定量檢測試劑盒樣本處理及要求:
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響*檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
在處理完上述各類生物標本后,確保每一步操作都嚴格遵循實驗規程,是保障實驗結果準確性的關鍵。對于細胞培養物上清或其他生物標本,若需長期保存以備后續分析,建議在-80℃條件下儲存,以最大限度地減少生物活性物質的降解。同時,記錄好每批標本的處理時間、離心條件及保存位置,便于后續追蹤與復現實驗。
值得注意的是,盡管離心是去除雜質、獲取純凈樣本的重要手段,但過高的離心速度或過長的時間也可能導致樣本中某些敏感成分的損失或變性。因此,在選擇離心參數時,需綜合考慮樣本類型、實驗目的及預期結果,必要時可設置預實驗進行優化。
此外,對于組織勻漿的制備,除了上述提到的PBS沖洗、剪碎、研磨及離心步驟外,還需注意操作過程中的無菌原則,避免外源微生物的污染。特別是在加入蛋白酶抑制劑時,要確保其濃度適宜,既能有效抑制蛋白酶活性,又不影響后續檢測方法的靈敏度。
最后,關于溶血標本的處理,一旦發現標本溶血,應立即標記并單獨存放,避免與正常標本混淆。對于溶血原因的分析,可從采血技術、抗凝劑使用、儲存條件等多方面進行排查,以期在未來的實驗中減少類似情況的發生。同時,探索開發對溶血具有更強耐受性的檢測方法,也是提高實驗靈活性和準確性的重要方向。
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響*檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
在處理完上述各類生物標本后,確保每一步操作都嚴格遵循實驗規程,是保障實驗結果準確性的關鍵。對于細胞培養物上清或其他生物標本,若需長期保存以備后續分析,建議在-80℃條件下儲存,以最大限度地減少生物活性物質的降解。同時,記錄好每批標本的處理時間、離心條件及保存位置,便于后續追蹤與復現實驗。
值得注意的是,盡管離心是去除雜質、獲取純凈樣本的重要手段,但過高的離心速度或過長的時間也可能導致樣本中某些敏感成分的損失或變性。因此,在選擇離心參數時,需綜合考慮樣本類型、實驗目的及預期結果,必要時可設置預實驗進行優化。
此外,對于組織勻漿的制備,除了上述提到的PBS沖洗、剪碎、研磨及離心步驟外,還需注意操作過程中的無菌原則,避免外源微生物的污染。特別是在加入蛋白酶抑制劑時,要確保其濃度適宜,既能有效抑制蛋白酶活性,又不影響后續檢測方法的靈敏度。
最后,關于溶血標本的處理,一旦發現標本溶血,應立即標記并單獨存放,避免與正常標本混淆。對于溶血原因的分析,可從采血技術、抗凝劑使用、儲存條件等多方面進行排查,以期在未來的實驗中減少類似情況的發生。同時,探索開發對溶血具有更強耐受性的檢測方法,也是提高實驗靈活性和準確性的重要方向。
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