在深入探討SH.hEXl(46.xx)人胚胎干細(xì)胞系的傳代方法時(shí)，我們不得不強(qiáng)調(diào)無菌操作與精確控制環(huán)境條件的重要性。為了維持這些細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性和增殖潛能，每一步操作都需細(xì)致入微。

傳代前，首先確保培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度穩(wěn)定在37°C，并含有5%的CO?，以模擬體內(nèi)環(huán)境。隨后，使用無菌技術(shù)從培養(yǎng)瓶中輕柔吸出舊培養(yǎng)基，避免對細(xì)胞層造成機(jī)械損傷。接下來，以適量的磷酸鹽緩沖液（PBS）輕輕洗滌細(xì)胞表面，去除殘留的培養(yǎng)基和死細(xì)胞，此步驟重復(fù)兩次以確保清潔。

隨后，加入適量的胰蛋白酶-EDTA溶液，覆蓋細(xì)胞層并置于培養(yǎng)箱中短暫孵育，具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞貼壁強(qiáng)度調(diào)整，以剛好使細(xì)胞呈單細(xì)胞懸液狀態(tài)為宜。通過顯微鏡觀察，一旦細(xì)胞開始變圓并輕輕脫離培養(yǎng)皿底部，立即加入等體積的含血清培養(yǎng)基中止胰酶作用，并輕柔吹打使細(xì)胞完全分散。

之后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，將細(xì)胞懸液按一定比例稀釋后接種到新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基至適當(dāng)體積，并輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞均勻分布。完成這一系列操作后，將培養(yǎng)瓶重新放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，定期檢查細(xì)胞生長狀態(tài)，適時(shí)進(jìn)行換液和傳代操作，以確保SH.hEXl(46.xx)人胚胎干細(xì)胞系的健康與活力。

值得注意的是，傳代過程中還需密切關(guān)注細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，如出現(xiàn)異常增殖、分化或污染跡象，應(yīng)及時(shí)采取措施處理，以維護(hù)細(xì)胞系的純度和功能特性。此外，建立詳細(xì)的操作記錄和質(zhì)量控制體系也是不可或缺的，它們?yōu)榭蒲泄ぷ鞯倪B續(xù)性和可重復(fù)性提供了重要保障。


產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。



注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。